产品目录

本试剂盒采用独特的缓冲系统，结合传统的异丙醇沉淀方法，可快速地获得大量高纯度的质粒DNA。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化和转染多种细胞等实验。

产品特点：

• 得率高：异丙醇直接沉淀，最高可获得1.5mg质粒DNA。
  
• 纯度好：经缓冲液P4和过滤器CS处理，满足多数转染实验要求。
  
• 简便快捷：只需简单的几步离心，1小时左右完成实验。
  
• 应用广泛：适用于酶切、PCR、转化、测序和转染等分子生物学实验，颜色指示剂使您的质粒提取效率更有保证。

试剂盒组成：

组分	规格
溶液P1	100mL
溶液P2	100mL
溶液P4	100mL
IndRed	500μL
洗脱缓冲液TB	30mL
RNase A (100mg/ml)	500μL
过滤器CS1	10个

保存条件：
室温(15～25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2～8℃。2～8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中，混匀后置于2～8℃保存，可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A在室温可稳定保存12个月以上。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)

• 溶液P1在使用前先加入RNase A（将试剂盒中提供的RNase A全部加入），混匀，置于2～8℃保存。
  
• 使用前先检查溶液P2和P4是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
  
• 自备约60mL的5M NaCl溶液。
  
• 注意不要直接接触溶液P2和P4，使用后应立即盖紧盖子。
  
• 使用过滤器时请将推柄小心缓慢地从过滤管中抽出，避免滤膜因压力而松动。
  
• 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、P4的用量；洗脱缓冲液推荐在65～70℃水浴中预热。
  
• IndRed的使用方法：IndRed是一种指示剂，用以指示整个操作的正确性，对人体无害。IndRed为可选试剂，客户根据需求选择是否添加。如果提取质粒后需要进行转染实验，不建议客户在实验中加入IndRed试剂。使用时按照IndRed：溶液P1=1:200进行混合，彻底颠倒混匀，混匀后的溶液为澄清的红色。将混匀后的溶液加入到收集好的菌体中彻底混匀，由于菌体的存在，混匀后的溶液为浑浊的红色；添加P2之后彻底混匀后，溶液的颜色为澄清的紫色，则说明充分裂解；再添加溶液P4至彻底混匀后，溶液为澄清的黄色，说明中和复性充分。

颜色指示剂：

图1：菌体中加入含IndRed的P1溶液，彻底混匀后溶液为浑浊的红色
图2：添加P2彻底混匀后，溶液颜色为澄清的紫色。如果在紫色中混有浑浊的红色，则裂解不充分，会大大影响质粒的提取效率，需继续混匀至颜色变为澄清的紫色。
图3～4：添加P4彻底混匀后，溶液颜色为澄清的黄色。如果在黄色中混有紫色（图3所示)，则复性不充分，会导致得到的双螺旋质粒量减少，需继续混匀至颜色变为澄清的黄色（图4所示)。

提取实例：
用本试剂盒提取100mL菌液的pEGFP质粒（OD₆₀₀=1.95)和pCMV质粒（OD₆₀₀=2.05)

图5：质粒提取得率
图6：质粒纯度

推荐每次菌液使用量：
高拷贝质粒推荐使用量为100mL，得率一般在500～1500μg左右；低拷贝质粒推荐使用量为200mL，得率一般在200～400μg左右。

质粒类型	处理量	得率
高拷贝质粒	菌液100mL	500μg～1.5mg质粒
低拷贝质粒	菌液200mL	200μg～400μg质粒

使用方法：

• 取100mL (根据培养菌体的浓度选择合适的量，低拷贝推荐用200mL)过夜培养的菌液，室温10000rpm (~11500×g)离心3min收集细菌。
  注意：菌液较多时，可多次离心并将菌体沉淀收集到一个离心管中。
  
• 尽量吸除上清，为确保上清液全部吸取，请倒置干净的吸水纸上。
  
• 向留有菌体沉淀的离心管中加入10mL溶液P1(请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
  注意：请务必彻底混悬，如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。IndRed试剂的加入对于后续PCR、酶切和测序都没有影响。使用时按照IndRed：溶液P1=1:200进行混合，彻底颠倒混匀，混匀后的溶液为澄清的红色。将混匀后的溶液加入到收集好的菌体中彻底混匀，由于菌体的存在，混匀后的溶液为浑浊的红色。如果提取质粒后需要进行转染实验，不建议客户在实验中加入IndRed试剂。
  
• 向离心管中加入10mL溶液P2，立即温和地上下翻转6～8次，使菌体充分裂解，室温放置5min。
  注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠，如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
  如果使用了IndRed，添加P2之后彻底混匀后，溶液的颜色为澄清的紫色。如果在紫色中混杂有浑浊的红色，则说明裂解不充分，继续混匀直至溶液颜色完全变为澄清的紫色。
  
• 向离心管中加入10mL溶液P4，立即温和地上下翻转6～8次，充分混匀，至溶液出现白色分散絮状沉淀。然后室温放置10min左右。10000rpm (~11500×g)离心5～10min，使白色沉淀离至管底（可适当增加离心时间），将全部溶液小心倒入过滤器CS1中（请避免倒入大量沉淀而阻塞过滤器），慢慢推动推柄过滤，滤液收集在干净的50mL的管中（客户自备）。
  注意：加入溶液P4后应立即混匀，避免产生局部沉淀。如果离心后倒入过滤器CS1中的溶液有白色沉淀也不会影响过滤。如果菌体过多(＞100mL)，推荐延长离心时间至20～30min。
  如果使用了IndRed，添加溶液P4之彻底混匀后，溶液为澄清的黄色，如果在黄色中混有紫色，则说明复性不充分，继续混匀至溶液颜色完全变为澄清的黄色。
  
• 向滤液中加入0.35倍滤液体积的异丙醇和1/2倍异丙醇体积的5M NaCl，上下颠倒充分混匀。
  注意：若此处无沉淀出现为正常现象。
  
• 4℃ 10000rpm (~11500×g)离心30min，轻轻倒掉上清液，将其倒置在吸水纸上。
  
• 向管中加入6mL 70%乙醇充分漂洗沉淀，4℃ 10000rpm (~11500×g)离心10min，轻轻倒掉上清液，将其倒置在吸水纸上。
  
• 重复操作步骤8。
  
• 将离心管敞口室温放置10～20min，使乙醇充分挥发后加入1～1.5mL洗脱缓冲液TB，充分溶解沉淀。
  注意：洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.5～8.0范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。洗脱缓冲液用量的多少主要是依据质粒的拷贝数以及实验所需要的浓度来确定。洗脱缓冲液体积不少于1mL，体积过小影响回收效率。DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
  

质粒DNA浓度及纯度检测：
得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。电泳可能为多条带，这些条带是质粒的多聚体造成的，不影响后续的酶切、转染等实验。OD₂₆₀值为1相当于大约50μg/ml双链DNA。
纯化的质粒DNA OD₂₆₀/OD₂₈₀通常在1.8～2.0左右，可直接应用于分子生物学等常规操作。如果溶解时不使用缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，但并不表示纯度低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值。
相关搜索：高纯质粒大量提取试剂盒(100～200mL)，质粒大提试剂盒，质粒大量提取试剂盒，质粒提取试剂盒，质粒DNA大提试剂盒，质粒DNA大量提取试剂盒，质粒DNA提取试剂盒，高纯质粒大提试剂盒，高纯质粒大量提取试剂盒，高纯质粒提取试剂盒，高纯质粒DNA大提试剂盒，高纯质粒DNA大量提取试剂盒，高纯质粒DNA提取试剂盒，高纯度质粒大提试剂盒，高纯度质粒大量提取试剂盒，高纯度质粒提取试剂盒，高纯度质粒DNA大提试剂盒，高纯度质粒DNA大量提取试剂盒，高纯度质粒DNA提取试剂盒，HighPure Maxi Plasmid DNA Kit(100-200mL)